2010年4月30日 星期五

由於東亞特有的銀蛇目蝶切入Euptychiina亞族的親緣關係使得一個新的東亞-北美間斷分布案例被發現

圖片來源:ashung
文獻來源:Pen˜ a, C., Nylin, S., Freitas, A. V. L. & Wahlberg, N. (2010). Biogeographic history of the butterfly subtribe Euptychiina (Lepidoptera, Nymphalidae, Satyrinae).—Zoologica Scripta, 39, 243–258.
doi:10.1111/j.1463-6409.2010.00421.x


蛺蝶科眼蝶亞科中具高多樣性的Euptychiina亞族過去被認為局限分布在美洲地區。然而,新的證據將東方區的銀蛇 目蝶(Palaeonympha opalina,又稱古眼蝶,分布於台灣和中國的中西部)歸入該亞族之下,使得該亞族的分布成為東亞-北美東部的間斷分布類型。這種東亞-北美東部分布類型雖然在其他動物群中已被發現,而在植物類群中也早在林奈時代之前就已知道,但是尚未在任何蝶類類群中被報導過。作者利用粒線體上的一個基因與四個細胞核 DNA片段,共計長度 4447 bp 的序列資料,分析102個 Euptychiina亞族下的分類群,以建立其親緣關係假說、評估其起源時間、主要分支之分化與生物地理學上的分析。Euptychiina亞族在 3100萬年前起源於南美洲。早期的Euptychiina亞族在始新世和漸新世之間、透過短暫的GAARlandia連接由北美洲擴散到南美洲。晚近之 東方區的銀蛇目蝶的間斷分布是由於南美洲一個支系朝北擴散、經由北美洲進入東亞。Palaeonympha屬的共祖與其姊妹群Megisto屬棲息在北亞和北美洲的帶狀森林中,過去曾以白令陸橋相連。而大約3100萬年前,白令陸橋的消失使得Palaeonympha屬和Megisto屬分開,且中新世晚 期(3150萬年前開始)的氣候巨變在北美洲西部造成嚴重的滅絕事件,故形成現在經典的「東亞-北美東部的間斷分布類型」。

本文章與台灣 產分類群相關者,是對銀蛇目蝶(Palaeonympha opalina)親緣關係地位之判斷,依據分子資料顯示,銀蛇目蝶應是Euptychiina亞族中某些局限分布在美洲之成員的姊妹群。此假說早在 1968年即由Miller提出,他發現Palaeonympha與Euptychiina亞族在形態上有某些相似性,這些發現促使他想要把這個東亞分布 的屬歸入原本僅有美洲產成員的Euptychiina亞族中,但是由於此奇特的間斷分布類型,最終Miller將銀蛇目蝶處理為分類地位未明的狀態。 Pen˜ a et al. (2006)的研究發現銀蛇目蝶和產於巴西東南方的Euptychiina亞族成員關係較密切,但是他並未全面地對產於北美洲和中美洲的 Euptychiina亞族成員進行採樣,故尚未發現經典的「東亞-北美東部的間斷分布類型」。本研究則進行較廣泛的採樣,進而重建並推論產於東方區的Palaeonympha的生物地理歷史,但本研究並未對每個屬中的每一個種作採樣,因此此親緣關係假說可能會受到較大屬的樣本增加而造成改變,此外,由 於只採樣銀蛇目蝶的其中一個產於台灣的亞種,因此無法確認銀蛇目蝶的每個亞種是否形成單系群。

Abstract
The diverse butterfly subtribe Euptychiina was thought to be restricted to the Americas. However, there is mounting evidence for the Oriental Palaeonympha opalina being part of Euptychiina and thus a disjunct distribution between it (in eastern Asia) and its sister taxon (in eastern North America). Such a disjunct distribution in both eastern Asia and eastern North America has never been reported for any butterfly taxon. We used 4447 bp of DNA sequences from one mitochondrial gene and four nuclear genes for 102 Euptychiina taxa to obtain a phylogenetic hypothesis of the subtribe, estimate dates of origin and diversification for major clades and perform a biogeographic analysis. Euptychiina originated 31 Ma in South America. Early Euptychiina dispersed from North to South America via the temporary connection known as GAARlandia during Eocene–Oligocene times. The current disjunct distribution of the Oriental Palaeonympha opalina is the result of a northbound dispersal of a lineage from South America into eastern Asia via North America. The common ancestor of Palaeonympha and its sister taxon Megisto inhabited the continuous forest belt across North Asia and North America, which was connected by Beringia. The closure of this connection caused the split between Palaeonympha and Megisto around 13 Ma and the severe extinctions in western North America because of the climatic changes of the Late Miocene (from 13.5 Ma onwards) resulted in the classic ‘eastern Asia and eastern North America’ disjunct distribution.

2010年4月25日 星期日

Limbusa MOORE, [1897]亞屬的修訂:系統學上的處理與名錄

文獻來源:Yokochi, T. 2010. Revision of the Subgenus Limbusa MOORE, [1897] (Lepidoptera, Nymphalidae, Adoliadini): part 1. systematic arrangement and taxonomic list. Bull. Kitakyushu Mus. Nat. Hist. Hum. Hist., Ser. A. 8: 19-67.

簡介
Limbusa亞屬自中南半島香北分布至華中地區,由於包含了超過100個已發表的種類,因此過去一直未有人針對其系統分類學進行完整研究。本文列舉了目前翠蛺蝶屬(Euthalia)下Limbusa亞屬的118個分類群,並提供這些種類的標本照。台灣產的翠蛺蝶除了閃電蛺蝶外,其於四種皆屬於本亞屬的成員。另外,Adolias thibetana Poujade and Euthalia aristides Oberthür的選模標本則是在本文中被指定。

2010年4月24日 星期六

第三屆亞洲鱗翅類昆蟲保育會議更新資訊

主辦與協辦單位已經擴增為好幾個, 會議舉辦地點也終於確定了, 請由此連結瞭解更多訊息

與其打鬥,不如溝通?以鱗翅目鉤蛾科幼蟲探討聽覺溝通訊息之演化起源

文獻來源: Jaclyn L. Scott, Akito Y. Kawahara, Jeffrey H. Skevington, Shen-Horn Yen, Abeer Sami, Myron L. Smith & Jayne E. Yack. 2010. The evolutionary origins of ritualized acoustic signals in caterpillars. Nature Communications 1: article number: 4 [link]

簡介

動物使用多種訊息作為同種與異種個體與聚落間的傳訊以及防禦工具,包括視覺、聽覺、嗅覺及味覺等形式。探索溝通訊息的演化起源一直是科學家們矚目的議題之一,目前的理論認為多數溝通訊息是由無訊息行為經由儀式化的過程發展而來,但能支持此一理論之實驗數據非常有限。在大型動物中,使用聲音訊息作為宣示領域用途之例子並不少見,但近年來部分科學家將研究焦點轉移至小型動物身上。本文即使用鱗翅目鉤蛾科(Drepanidae)幼蟲之尾部發聲行為作為主題,由於鉤蛾幼蟲如Drepana arcuata等種類,會吐絲纏住葉片形成巢穴,當侵入者接近時會利用腹部末端的槳狀特化構造與大顎敲擊震動,發出宣示領域的防禦訊息,但這樣的行為似乎僅存在於幼蟲肛足退化之種類(如多數之鉤蛾亞科Drepaniae幼蟲),而具有原足之種類(如大鉤蛾亞科Cyclidinae與波紋蛾亞科Thyatirinae)不但不具發聲防禦行為,且原足之爬行功能良好。這些特點使得鉤蛾科成為探討發聲防禦行為演化起源的良好材料。作者假設防禦訊息的使用,是源自某種無訊息的行為(如爬行運動),因此取36種具有代表性的鉤蛾科幼蟲做為材料,包括具有肛足與退化之種類。作者透過親緣關係的重建,檢視防禦訊息的使用在鉤蛾科內部的演化起源;並經由幼蟲形態與行為之分析,進一步探討震動發聲與爬行運動在構造與動作上是否具有同源性。若儀式化的假說為真,則防禦發聲行為的種類其尾部之構造與移動方式,應與不具此行為之種類同源;且當肛足特徵被映像在系統親緣樹上時,具有肛足在鉤蛾科內部應為較原始之特徵狀態。結果顯示,具有原足在鉤蛾科內部中呈現為祖態;而用來發出防禦訊息之特化槳狀結構,是由原足上之剛毛演化而來。另外,防禦發聲時腹部之移動方式,也與步行運動一致。進一步的行為分析,則顯示防禦訊息是由幼蟲打鬥行為發展而來。因此作者認為幼蟲使用腹部末端發出震動防禦訊息,是由步行這項不具訊息之行為演變而來,發聲防禦的行為取代了打鬥行為,使得幼蟲可以保留更多能量用以生存。本文為溝通訊息之演化理論提供了更多實驗證據。

2010年4月22日 星期四

工業汙染與蛾類黑化關係的另類解讀 - 越黑免疫力越好?

文獻來源: Mikkola K, Rantala MJ. 2010.Immune defence, a possible nonvisual selective factor. Biological Journal of the Linnean Society 99: 831–838 [Abstract]

工業污染所導所導致的黑化(melanism)最早由Kettlewell(1973)提出,樺尺蛾(Biston betularius)的黑化可以在工業污染環境下,在視覺提供較好的保護色,然而Kettlewell的說法卻被卻在提出的幾年後遭到質疑,因為在野外觀察到的樺尺蛾生態習性,個體黑化與否並不會影響到其被捕食率(Mikkola 1979 & 1984),而隨著Creed et al. (1980)的研究中發現,黑化個體對比原型的具有更好的適性,且這與其外觀並無相關聯,這個研究將黑化帶入另一個方向。免疫力提升是其中一個方向,在異物(如:病毒、真菌、細菌、重金屬等)入侵昆蟲體內會形成包膜(encapsulation)以抵抗病毒或中和毒性(Salt 1970Washbburn et al. 1996;Gupta 2001),並引發一連串生化反應以及黑色素的沉積,相關的研究也在直翅目、蜻蛉目以及鱗翅目的幼蟲及蛹發表。Mikkola(2010)藉由鱗翅目的松針毒蛾(Lymantria monacha) 植入尼龍纖維(nylon monofilament)的免疫試驗,探討免疫力提升與個體黑化之關係,實驗結果顯示黑化松針毒蛾相較白色個體有較強烈的包膜反應,換句話說,黑化的個體有較強烈的免疫抵抗反應,且證實了黑色素參與包膜反應並反應在體色上,這也說明,在工業污染的環境下的個體黑化,有可能僅是強化免疫反應的副產物而已,但在實際的野外情況卻很難區別

2010年4月19日 星期一

斑蝶移動路線 玉管處揭密

斑蝶移動路線 玉管處揭密【中央社╱南投縣19日電】
2010.04.19 08:56 pm

玉管處今天表示,透過斑蝶標放捕獲,發現台灣島內斑蝶移動路徑是複雜多元的,也證實部分移動性斑蝶順著濁水溪、陳有蘭溪、沙里仙溪或出水溪而飛越塔塔加鞍部的可能性。

玉山園區塔塔加鞍部常可見到成群由北往南飛的斑蝶,形成壯觀的蝶道。玉山國家公園管理處調查發現,塔塔加鞍部的斑蝶,部分可能是飛越雲林縣林內高速公路觸口段的北上斑蝶。

玉管處調查也證實,台灣東部越冬的斑蝶與西部北上的斑蝶族群是交流的。

玉管處表示,多年來進行園區的蝶相監測,發現塔塔加鞍部是許多斑蝶移動時必經的埡口,其中包括分布台灣的6種青斑蝶類及4種紫斑蝶。

究竟這些飛越塔塔加鞍部的斑蝶從哪裡來?飛往哪裡去?玉管處委請中華民國國家公園學會教授陳建志團隊持續跨區域追蹤,發現這些斑蝶主要由2條路線飛越塔塔加鞍部。

其一是順著沙里仙溪由下往上飛越鞍部,另一則由神木林道與神木村的出水溪方向、再從塔塔加遊客中心前飛往鞍部。

玉管處說,2008年的同步連線調查作業中,發現同一時段飛越鞍部的斑蝶種類與數量比例,與飛過高速公路林內觸口段的斑蝶相似,因而推論飛越鞍部的斑蝶有些可能是北上斑蝶順著濁水溪、陳有蘭溪、沙里仙溪或出水溪飛到塔塔加鞍部。

為證實此一推論,玉管處自2009年起在清明節前後越冬斑蝶往北移動時,出動大批人馬同步在林內觸口地區及塔塔加鞍部同步進行斑蝶標放。

去年3月19日於林內鄉觸口捕獲1隻編號M14-1221的斯氏紫斑蝶,經證實是由義守大學老師趙仁方所帶領的越冬斑蝶標放志工在2008年12月21日於台東大武地區所標放,經過89天後在林內鄉再捕獲。

此一發現,證實台灣東部越冬的斑蝶與西部北上的斑蝶族群是交流的,但斯氏紫斑蝶如何由大武飛到林內,有待探討。

另外,陳建志4日於陳有蘭溪與濁水溪交會處的水里永興神木附近進行調查,再捕獲1隻標記M71-0206的雄性小紋青斑蝶,經查證也是由越冬斑蝶標放志工於今年2月6日於台東龍田地區標放,這隻小紋青斑蝶經過58天後飛抵陳有蘭溪與濁水溪交會處。

玉管處表示,透過斯氏紫斑蝶及小紋青斑蝶標放捕獲,證實台灣島內斑蝶的移動路徑是複雜多元的,氣流及地形都是影響牠們移動的重要因素;也證實部分移動性斑蝶順著濁水溪、陳有蘭溪、沙里仙溪或出水溪而飛越塔塔加鞍部的可能性。

【2010/04/19 中央社】

2010年4月13日 星期二

利用生命條碼技術確認一種捲蛾的廣食性與確認該研究中另一種捲蛾的分類地位

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Sources: Hulcr J, Miller SE, Setliff GP, Darrow K, Mueller ND, Hebert PDN & Weiblen GD. (2007) DNA barcoding confirms polyphagy in a generalist moth, Homona mermerodes (Lepidoptera: Tortricidae). Molecular Ecology Notes 7: 549-557. [abstract] Miller SE, Helgen LE & Heber PDN. (2010) Clarification of the identity of Homona salaconis (Lepidoptera: Tortricidae). Molecular Ecology Resources 10: 580. [abstract]

簡介
生命條碼技術(DNA barcoding)應用在許多為人所知的昆蟲分類上,已經顯示在許多被命名的種類中,仍可能有隱藏種。本篇文章使用一種捲蛾,Homona mermerodes,藉由其寄主記錄與生命條碼的DNA片段的haplotype多樣性,藉以評估其分類與鑑定。H. mermerodes在利用不同寄主植物個體的遺傳分化程度比起其他Homona屬內種間的分化程度為低。新幾內亞與澳洲間的個體,不同haplotype間的遺傳分化低於種間的分化程度。生命條碼能夠用於鑑定廣為人知的植食性昆蟲,也能夠用以發掘隱藏種,這個方法也同樣的能夠用來鑑定使用不同寄主植物的物種是否為相同物種。本篇指定了一個新的選模標本,並且首次總結其生物地理與雄性生殖器特徵。DNA鑑定之後,在上篇的文章中,作者們選用了Homona的分布於新幾內亞其中一種,但當時無法取得足夠的分類資訊,於是當時將該種暫定為Homona sp. nr. salaconis,而真正的H. salaconis分布於菲律賓,而後作者們取得菲律賓的標本,同樣分析其DNA條碼片段,發現菲律賓的樣本內有0.15%的差異,而與新幾內亞的種類有3.30-4.28%的差異;同時比較型態的差異,作者們推斷H. sp. nr salaconis應與H. salaconis為不同種。藉由比對大英自然史博物館的標本,H. sp. nr salaconis應為H. auriga,這個種名目前是H. salaconis的一個同物異名,但根據目前結果應該被復活使用。

2010年4月10日 星期六

種化是由寄主驅動還是地理隔絕?以DNA條碼進行生態群聚間的族群遺傳比較

文獻來源:KJ Craft, SU Pauls, K Darrow, SE Miller, PDN Hebert,, LE Helgen, V Novotny, GD Weiblen. 2010. Population genetics of ecological communities with DNA barcodes: An example from New Guinea Lepidoptera. Proceedings of the National Academy of Science 107(11):5041-5046.

對生態上同功群的比較族群遺傳結構可反映出關於群聚多樣性的起源與維持之差異模式的通性。新幾內亞與美洲的熱帶鱗翅目寄主專一性與生態系間物種多樣性之間矛 盾的評估,已點燃了解釋多樣性隨緯度呈梯度變化之爭論:是由寄主植物互動造成分化?或是地理隔絕?作者由新幾內亞的八個地點與分屬於四個屬的寄主植物上選 取28種鱗翅目昆蟲,對共計1359個個體選取粒線體COI基因進行基因型分析,並評估族群分化與寄主植物和地理之關係。分子差異與基因型網狀分析顯示生 態上相似的同域物種其遺傳結構樣式有變化。有四分之一缺乏距離隔離或寄主互動造成的變異,但也有21%兩者兼具。14%的物種存有寄主互動造成的變異但不 具地理隔絕,而18%的物種則正好相反,另外21%的結果則模稜兩可,故目前結果看來,分子差異與基因型網狀分析得到的是 不相容的結果。群聚成員之間食性寬廣度的差異推測食性專一所造成的種化機制是重要的,但對熱帶鱗翅目的分化而言並非是普遍通行的。而地理廣 布的基因型則挑戰了割據生物地理學的預測。播遷是重要的,而鱗翅目的群聚則隨其組成物種的不同親緣地理歷史表現出頗高的動態變化。主要熱帶區與溫帶區的草 食者之間的族群遺傳仍有待測試其生態學理論和評估全球生物多樣性樣式之預測。

Comparative population genetics of ecological guilds can reveal generalities in patterns of differentiation bearing on hypotheses regarding the origin and maintenance of community diversity. Contradictory estimates of host specificity and beta diversity in tropical Lepidoptera (moths and butterflies) from New Guinea and the Americas have sparked debate on the role of host-associated divergence and geographic isolation in explaining latitudinal diversity gradients. We sampled haplotypes of mitochondrial cytochrome c oxidase I from 28 Lepidoptera species and 1,359 individuals across four host plant genera and eight sites in New Guinea to estimate population divergence in relation to host specificity and geography. Analyses of molecular variance and haplotype networks indicate varying patterns of genetic structure among ecologically similar sympatric species. One-quarter lacked evidence of isolation by distance or host-associated differentiation, whereas 21% exhibited both. Fourteen percent of the species exhibited host-associated differentiation without geographic isolation, 18% showed the opposite, and 21% were equivocal, insofar as analyses of molecular variance and haplotype networks yielded incongruent patterns. Variation in dietary breadth among community members suggests that speciation by specialization is an important, but not universal, mechanism for diversification of tropical Lepidoptera. Geographically widespread haplotypes challenge predictions of vicariance biogeography. Dispersal is important, and Lepidoptera communities appear to be highly dynamic according to the various phylogeographic histories of component species. Population genetic comparisons among herbivores of major tropical and temperate regions are needed to test predictions of ecological theory and evaluate global patterns of biodiversity.

2010年4月4日 星期日

rDNA在鱗翅目昆蟲的染色體上群集的演化歷程

文獻出處:Nguyen P., Sahara K., Yoshido A. & Marec F. (2010) Evolutionary dynamics of rDNA clusters on chromosomes of moths and butterflies (Lepidoptera). Genetica 138: 343-354. [abstract]

簡介
本篇文章檢驗rDNA在核仁組成中心 (nucleolar organizer regions, NORs)的染色體分布,共採用18種鱗翅目昆蟲,以螢光雜合的方式雜合蘋果蠹蛾的18S rDNA作為探針進行測試。大部分的種類顯示有1或2種rDNA的叢集在其核型,但也有發現例外是4-11個叢集的個體。本篇的結果顯示rDNA在鱗翅目昆蟲中的演化歷程,但除了高度保守的夜蛾總科除外。在有一個NOR的核型,rDNA呈現不緊密是普遍的,而在有兩個NOR的核型,rDNA則大多數呈現叢集。一個單一不緊密的NOR,藉由在兩個NOR染色體間混合的可能區域缺乏證據支持。在某些種類中,rDNA傳播到新的染色體終端區域已經被發現。rDNA叢集的增殖並未藉由染色體數量的改變而導致以染色體的分裂韋主要增殖方式。基於rDNA在鱗翅目昆蟲的動態與核架構的核型演化,本篇推測異位的重組,如在非同源染色體的重複序列間的同源重組,可能是主要的rDNA重複的來源。

2010年4月1日 星期四

如何從大型鱗翅目的百年標本獲得DNA資訊並減低標本破壞的程度

文獻來源:AK Hundoerfer, IJ Kitching. 2010. A Method for Improving DNA Yield from Century-plus Old Specimens of Large Lepidoptera while Minimizing Damage to External and Internal Abdominal Characters. Arthopod Systematics & Phylogeny 68(1): 151-155.

Abstract
The external and internal genitalia of Lepidoptera have long provided a wealth of taxonomic and phylogenetic characters. However, traditional genitalia preparation techniques destroy both DNA, which is increasingly being used in Lepidoptera phylogenetics and species discrimination, and the scale pattern of the abdomen. In this paper, we describe a procedure for extracting both DNA for sequence analysis and genitalia from large Lepidoptera while retaining the surface scaling of the abdomen and, by permitting reattachment of the empty but still scaled abdomen, the general appearance of the specimens. Specimens both before and after the procedure has been undertaken are illustrated.

簡介
一. 介紹
鱗翅目的成蟲腹部生殖器結構在鑑定、分類特徵以及親緣關係重建上一直被認為具有豐富的資訊。解剖並檢視此形態結構的前置方法,大多以KOH水溶液來進行軟化、去除雜質、鱗片與毛等" 清潔(cleaning)"步驟,然而此程序無法將肌肉與其他內部結構保留,更遑論DNA資訊的保存。過去研究者若想取得老鱗翅目標本(通常指保存約 50~100年的針插乾燥標本)的DNA,主要來源是拔取標本的其中一隻足,然而文章作者認為:博物館館藏 經理(curator)並不希望因為量少而甚至無法預期能否成功獲得的DNA片段,去允許研究者破壞其館藏標本的一部份,儘管該部份所造成的標本損壞可能 非常微小,況且實際上從古老標本的一隻足所能獲得DNA量也不多。作者提出:當需要針對具歷史價值的珍貴老標本進行生殖器資訊分析時,可以透過改變操作流 程ー即在直接使用會破壞DNA的KOH溶液作為軟化劑之前,加入可保存DNA的步驟ー以使標本在最少量破壞 下獲得最多的形態與分子資訊。類似的概念與方法已在Knölke et al. (2005)提出,該文章選用的材料為較小型的鱗翅目,由於目前並不認為小型鱗翅目的腹部特徵能提供親緣關 係重建之資訊,故過程中會將腹部鱗片去除,而本次介紹的文章則針對體型較大的鱗翅目天蛾科類群Hyles屬來測試此方法的可行性,以及說明操作流程當中保 留腹部鱗片特徵之方法。

二. 方法
1. 由於任何解剖與移除標本的結構皆會使標本失去部份的形態資訊,故在事前必須以高解析度影像做標本處理前的紀錄。
2. 解剖工具如鑷子或夾子等可能帶有其他DNA殘餘物者,以浸泡在96% denatured ethanol中並置以火烤一小段時間處理,再用DNA-free的工具由標本取下主要含生殖器結構的腹部節段。
3. 將單一腹部樣本放於合適大小的管中並加入足夠的diluted lysis buffer水溶液,浸置於攝氏55度環境,視取得之腹部大小狀態評估時間長短。
4. 當腹部內部組織軟化時,以pipette將過量的 diluted lysis buffer取出,並可將腹部一側剪開,使後續的蛋白質水解溶能夠更有效率的作用,若需要保留鱗片資訊則應避免解剖過程中任何的晃動。
5. 將腹部由buffer取出,在顯微鏡下操作將軟化組織取出再度置於蛋白質水解溶液中,並減少生殖器結構的破壞。後續將軟化組織放入DNA-free管中並 儲存於攝氏-20~-80度狀態中,供未來DNA分析用。
6. 將生殖器由腹部取下以KOH溶液溶解其他非骨化區殘質,後續步驟以如同過去的生殖器解剖流程處理此結構。
7. 剩餘的腹部骨化區與附著未脫落的鱗片依序以水、70%酒精洗淨後風乾,情況許可下將此結構以水性昆蟲膠黏回標本原位。
8. 使用抽取古老DNA (acient DNA, aDNA)的kit進行DNA萃取、以小而重疊的引子設計片段來增幅目標基因,後續再以軟體編輯整段目標基因的片段以及重建其親緣關係。

三. 結果
文章作者選用四隻標本年齡在45~103年的天蛾科Hyles屬標本進行測試,將所選取粒線體的三個基因 (COI, COII, tRNA-leu)分成13個長度約110–280 bp的片段進行定序,成功率在81~88%(最古老的103年標本達84%)。相較於過去以古標本足部來抽取DNA的方法,新方法可獲得更大的DNA量。 而新方法使取用腹部與生殖器進行形態分析的事件透過步驟的改變獲得了DNA抽取的加值與標本破壞的可能性降低。然而整個流程也有一些小缺點:(1) 比傳統上以KOH溶液溶解非骨化組織、並直接取得乾淨的生殖器結構資訊來得費時(傳統上只需數小時至一天,新方法至少需兩天半) 以及(2)需要準備更多的設備,例如DNA-free的解剖器具與瓶管容器。 此外,新方法亦可使用於年輕標本,只要選擇適當的kit即可操作。

相關文獻:
1. Hall, T.A. 1999. BioEdit: a user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program for Windows 95/98/NT. Nucleic Acids Symposia Series 41: 95–98.
2. Holloway, J. D., G. Kibby and D. Peggie. 2001. The families of Malesian moths and butterflies. – Fauna Malesiana Handbook 3. Brill, Leiden, Boston and Köln, xi + 455 pp.
3. Hundsdoerfer, A. K., D. Rubinoff, M. Attieé, M. Wink adn I. J. Kitching. 2009. A revised molecular phylogeny of the globally distributed hawkmoth genus Hyles (Lepidoptera: Sphingidae), based on mitochondrial and nuclear DNA sequences. Molecular Phylogenetics and Evolution 52: 852–865.
4. Kehlmaier, C. and T. Assmann. 2010. Molecular analysis meets morphology based systematics – a synthetic approach for Chalarinae (Insecta: Diptera: Pipunculidae). Systematic
En to mology 35: 181–195.
5. Kitching, I. J. 2002. The phylogenetic relationships of Morgan’s Sphinx, Xanthopan morganii (Walker), the tribe Acherontiini, and allied long-tongued hawkmoths (Lepidoptera:
Sphingidae, Sphinginae). Zoological Journal of the Linnean Society 135: 471–527.
6. Kitching, I. J. 2003. Phylogeny of the death’s head hawkmoths, Acherontia [Laspeyres], and related genera (Lepidoptera: Sphingidae: Sphinginae: Acherontiini). Systematic Entomology
28: 71–88.
7. Knölke, S., S. Erlacher, A. Hausmann, M. A. Miller and A. H. Segerer. 2005. A procedure for combined genitalia extraction and DNA extraction in Lepidoptera. Insect Systematics
and Evolution 35: 401–409.
8. Scoble, M. J. 1992. The Lepidoptera. Form, Function and Diversity. Oxford University Press, Oxford, xi + 404 pp.
9. Simonsen,T. J. 2006. Fritillary phylogeny, classification, and larval host plants: reconstructed mainly on the basis of male and female genitalic morphology (Lepidoptera: Nymphalidae:
Argynnini). Biological Journal of the Linnean Society 89: 627–683.
10. Wink, M. 2007. Taxonomy, phylogeny and systematics. Pp. 57-73 in: D. M. Bird & K. L. Bildstein (eds.), Raptor Research and Management Techniques. Hancockhouse Publishers.